食用菌（平菇）母种（一级种）的制作

作者： [成群]　　文章来源： [食用菌研究中心]　　点击数：[4908]　　更新时间：[2011-12-14]

一、通过母种（一级种）的制作，培养基制备，无菌操作，组织分离方法等技术。

二．微生物的营养需要多种原料，根据需要选择合适的营养成分配制成培养基，并调节适宜的PH。菌种的培养是食用菌生产的重要环节，可采用子实体接种，在无菌培养基上，通过无菌操作，恒温培养而获得

三．材料用具

高压灭菌锅、恒温箱、试管或锥形瓶或烧杯、、1厘米厚小木条、电炉、大号烧杯、长玻棒、小刀、接种铲、钢锅、长镊子、酒精灯、雾化消毒粉等

土豆、琼脂、葡萄糖 、新鲜平菇子实体、水

四、方法与步骤

（一）母种培养基制作

l．采用的培养基配方 ：马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基）马铃薯(去皮)200mg，葡萄糖20.0g，琼脂2.0g，水l000mL。

2．培养基制作：马铃薯去皮、去眼，切成薄片，称200克放入锅中，煮至熟而不烂，四层纱布过滤，加入琼脂小火搅拌至全部溶化，补足水分后加糖。

３、分装：溶解后趁热分装到试管中，约占1/5，塞上棉塞。或分装到小锥形瓶中在最宽处，塞上棉塞。分装时应注意不要将培养液沾到试管管口，避免将来发生污染。若有沾粘，则应用干净纱布及时擦净。分装的试管直接加棉花塞封口，棉花应用普通棉花，不能用脱脂棉，棉花塞起到过滤空气的作用，不宜过松或过紧，以封口后手持棉塞轻轻摇动试管不脱落，且旋转拨出顺利为度。棉塞外观要求光滑，不能塞过浅或过深，否则造成操作困难。

灭菌时将试管扎成捆，用牛皮纸或其它防潮纸将整捆试管的棉塞包好，直接放入底部盛水的高压灭菌锅内，加热灭菌４５分钟。

４、培养基灭菌

按灭菌锅操作指南操作。特别注意：内锅保持干燥，外锅加开水淹过支架，两两对称加盖。０.０５ＭＰ时放出冷气，再加压至０.１ＭＰ维持压力４５分钟。灭菌锅无恒压控制时要人工控制热源。我们是不断切断电源控制。

待压力降至０后，打开锅，稍待片刻再取出，以保证干燥。

５、搁置斜面

将试管放在木条上搁置斜面，使之自然冷却，凝固成斜面，斜面为试管长的1/2，冷却后即成斜面培养基。

（二）接种

（1）接种箱内用气雾消毒１５分钟，将待接的斜面试管以及新鲜干平菇子实体、接种针等放入已消毒的接种箱内。

（2）用75%的酒精溶液棉球擦双手、小刀片及子实体消毒。点燃酒精灯。

（3）左手持住空白斜面试管，右手夹持棉塞，火焰封口。

 

（4）刀取黄豆大小的菌盖内部白色菌丝，迅速移接到空白斜面中央，将棉塞塞回试管。

（三）．培养

将已接种好的试管放入恒温培养箱，在22～26℃下培养　８-１０天，菌丝长满试管即为一级种（母种）。

五、菌丝的挑选

１.白色菌丝均匀布满培养基面为最好。

２.个别菌丝生长不丰满，可能与接种时组织块的摆放位置有关。

３.不足的分析：

培养基管壁有水珠，可能配置时水分稍多或外界气温过低（２^ＯＣ）有关。

试管培养基量多，造成斜面不够长。